Tsukuné Aono est un jeune garçon, tout à fait banal, qui, malheureusement, a raté tous les examens d'entrée. Par un « coup de chance », il se retrouve dans un lycée, à première vue banal, mais qui n'est en fait ni plus ni moins qu'un lycée… pour monstres ! Là, il fait la rencontre de Moka Akashiya. Cette jeune fille, à l'apparence angélique, cache en réalité une double personnalité et des pouvoirs de vampire très puissants qui se révèlent lorsque l'on arrache le rosaire ornant son cou. Grâce aux pouvoir de Moka, tout deux vont combattre plusieurs monstres. Plus tard, Tsukuné et Moka rencontreront la succube Kurumu Kurono et un loup garou, président du club de journalisme, Ginei Morioka, surnommé "Gin". dans le deuxième tome, on découvre aussi Yukari, une petite sorcière surdouée. Et enfin par la suite, ils rencontreront Mizore qui est une femme des glaces ayant quelques tendances de rodeuse...

Tsukune Aono

C'est un garçon tout à fait banal. Il est entré au lycée Yokkai (qui signifie "monstre" en japonais) par hasard mais aussi parce qu'il a raté tous les autres examens d'entrée. Il est amoureux de Moka. Par la suite, Moka lui passe de son sang et Tsukune devient, temporairement au départ, vampire puis le sang de Moka s'étant développé dans son corps, il le devient tout seul pendant les combats. Malheureusement, cette aptitude a un revers de médaille: le fait que Tsukune soit humain le met en danger lorsqu'il utilise ses pouvoirs vampiriques. Il y a alors un risque qu'il se transforme en ghoul, monstre sanguinaire incontrôlable. Cette transformation est ensuite scellée par le "Holly lock", objet de la même nature que le rosaire de Moka. Ce sceau lui permettra finalement de parvenir à contrôler ses transformations. Même si il parait un peu peureux de prime abord, on decouvre vite qu'il est très courageux et très gentil, n'hésitant pas une seconde à se sacrifier pour ses amis. Tsukune est également attentionné envers ses amis (peut-être même un peu trop) et cherche toujours à les aider.

Moka Akashiya

C'est un vampire mais ses pouvoirs et son autre personnalité ne se dévoile que lorsque Tsukune lui enlève son rosaire. Tous deux sont restés très amis même lorsque Moka a découvert qu'il était un humain. En effet Moka déteste les humains car elle était obligée d'aller dans des écoles humaines (jusqu'au collège) où elle était mise à l'écart. De plus elle se sentait bizarre du fait que les humains ne croient pas en l'existence des vampires. Elle est allergique à l'eau pure (comme tous les vampires dans le manga) ce qui fait qu'elle mélange des herbes à l'eau qu'elle boit. De plus elle ne peut pas se baigner dans une piscine. Elle est amoureuse de Tsukune. C'est probablement l'un des monstres les plus puissants de l'école. À ce jour, seuls Kuyo, Hokuto Kaneshiro et Tsukune ont la puissance nécessaire pour rivaliser avec elle.

Moka vampire

Version libérée de Moka, c'est l'alter-ego de Moka mais aussi sa véritable personnalité. Elle est identique à Moka sauf qu'elle possède des yeux rouges et une chevelure argentée (alors que Moka Akashiya possède des cheveux roses). Dans la version animée, Dark Moka semble avoir une plus forte poitrine et un plus grand tour de hanche (comme le suggère l'animation de sa transformation). C'est une vampire et possède une force surhumaine et une vitesse décuplée. Au sens du manga, les vampires sont des monstres de classe légendaire ayant la capacité de transformer leur énergie de monstre en force, cependant ce don peut être annuler si Dark Moka est recouverte d'eau. Elle semble très antipathique et arrogante, mais on voit qu'elle s'inquiète pour le héros Tsukune. Elle apparait la plus part du temps en combat, après que Tsukune lui ôte son rosaire.

Kurumu Kurono

C'est une succube qui va tenter d'ensorceler Tsukune pour en faire son esclave et se venger de Moka que les garçons trouvent plus belle. En effet, elle voulait envouter tous les garçons pour en faire ses esclaves et en faire un harem mais elle n'a pas pu parce que les lycéens lui préféraient Moka. Finalement toutes deux se combattront et Tsukune demandera à épargner la succube. Du coup, celle-ci en tombera amoureuse et le choisira comme étant l'élu (l'homme avec qui elle doit se reproduire). Kurumu rejoindra le club de journalisme uniquement pour passer plus de temps avec lui, mais finira par y prendre goût.

Ginei Morioka (ou "Gin")

Gin est le président, un peu obsédé(voire vraiment pervers), du club de journalisme. C'est aussi un loup garou. L'année avant l'arrivée de Tsukune et Moka, lui et le reste du club (tous les autres membres n'y étaient pas) s'étaient rebellés contre le comité de sécurité, d'où une intervention "musclée" du dit comité.

Yukari Sendo

Jeune sorcière/magicienne de 11 ans socialement inadaptée du fait de son appartenance à une classe rejetée autant par les humains que par les monstres, elle se fait accepter à sa grande surprise par tout le groupe de Tsukuné. Elle tombera amoureuse à la fois de Tsukuné et de Moka qu'elle suivra et aidera dans tous leurs périples. Elle est la plus jeune du groupe mais est pourtant dans la même classe que Tsukuné du fait de sa grande intelligence qui fait d'elle une élève surdouée, excellant dans toutes les matières.

Mizore Shirayuki

Camarade de classe de Moka et de Tsukune. Elle n'est pas allée en cours de tout le premier semestre, ce qui ne l'a pas empêchée d'apprendre par cœur tous les articles écrits par Tsukuné dans le journal de l'école et d'en tomber amoureuse. C'est une Yuki-onna ou femme des neiges, elle manipule la glace et sous sa forme de monstre ses doigts deviennent des pics de glace meurtriers. Elle aide le club de journalisme, suite à la demande de Tsukune dans la première saison du manga, puis elle le rejoindra officiellement dans le tome 2 de la saison II.